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方法如下:
1、将待分离的无机盐样品加入离心管中。
2、加入适当比例的苯酚等有机物。
3、使用低温离心机将上述混合液离心,可用较低的离心速度,为5000-8000rpm。
一、样本制备
首先,将低温超速离心机预冷至4℃。使用泡沫箱装冰备用。配置裂解液(10ml裂解液+1片蛋白酶抑制剂),然后取出样本。细胞样本按1*106细胞加50uL裂解液;10mg组织样本加100uL裂解液。加入裂解液后,细胞样本通过吹打混匀,组织样本先用超声破碎仪研磨成碎片。置冰上裂解30分钟,每10分钟震荡混匀一次。然后放置于提前预冷的低温超速离心机中,4℃,12000rpm/min离心15分钟。取上清,转移至准备好的离心管中,置冰上保存。
二、样本定量
提前预热酶标仪至37℃。配置蛋白标准液(浓度分别为0,0.05,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ug/ul),每2uL样本上清加18uLPBS准备样本稀释液。取96孔板,在纸上标记标准液及样本稀释液加入的孔位。准备一个新的离心管,计算需要的bca反应液的体积。现配现用,以透明液:蓝色液=50:1的比例配置bca反应液。每个孔中先加入200uL的bca反应液,然后按照标出的孔位分别加入标准液及样本稀释液。酶标仪恒温37℃反应30分钟。在562nm处用酶标仪测量吸光度,软件会自动根据吸光度得到标曲并计算出样品蛋白浓度(该浓度是稀释10倍后的浓度,后面计算需要乘以10)。
三、样本均一化
根据蛋白浓度计算每个样品所需的母液体积,随后加入5*loadingbuffer和pbs(或ripa或1*loadingbuffer),调整蛋白浓度至1ug/ul。95℃金属浴5min煮样,冷却后室温下12000g,1min离心。可直接上样也可-20摄氏度冷冻保存。上样前95℃煮5分钟后12000g离心1分钟。
四、配胶
准备好空胶板及试剂等。按配方配置分离胶,混匀后加至胶板第二格下沿(胶板2/3处多1mm)。用无水乙醇液封,室温下至胶凝固后弃去乙醇,用滤纸吸干残余乙醇。按配方配置浓缩胶并混匀。将胶板灌满后缓慢插入样本梳(过程中不能有气泡)。室温下静置待其凝固,可以立即使用也可在4摄氏度湿润条件下保存一周。
五、电泳及转膜
配置1*电泳液(按500ml/槽配置),准备电泳槽及电泳盒、盖(需要检查漏液)。撕去防漏胶条、拔出样本梳。短边向内放入电泳槽并固定,加入电泳液至槽内最高点。用上样专用枪头将15uL样本缓慢注入上样孔(10孔梳)。剩余电泳液倒入电泳盒内,盖上电泳盖。恒压80V,30min。将电泳槽置于冰水混合物中恒压120V,90min。提前1小时配置转膜液(按800ml/槽配置),并置于4℃冰箱中预冷。准备好转膜槽、滤纸、海绵(提前用转膜液浸湿)、膜(其中PVDF膜需要在甲醇中激活1min)。取出胶板并冲洗干净,将胶切成合适大小(凝胶不能弄破)。按负极-正极:海绵-滤纸-胶-膜-滤纸-海绵的顺序放置好(其中胶和膜间不能有气泡)。盖紧转印槽,小心放入电泳盒中,内外槽加满转膜液。盖上电泳盒盖,恒流300mA,冰水混合物中转膜90min。
六、封闭及孵育
用TBST配置5%脱脂牛奶。镊子取出转印完毕的膜,在正面标记出marker。将膜正面朝上放入配好的5%脱脂牛奶中,摇床25r/min室温孵育1小时。用TBST洗膜3次,每次10min,100r/min。用TBST洗膜3次,每次10min,100r/min。配置一抗,弃去TBST,加入一抗。将一抗回收至原先的离心管中。用TBST洗膜3次,每次10min,100r/min。配置二抗稀释液,弃去TBST,加入二抗稀释液。于室温下25r/min孵育2小时。弃去二抗稀释液,加入TBST洗膜3次,每次10min,100r/min。
七、显影
配置ECL。化学发光液A、B等量配置并混匀后滴在转印膜上(膜需吸干TBST)。反应2分钟,化学发光仪(暗室压片)成像。暗室压片:提前取出定、显影液倒入相应托盘中。将转印膜放入压片夹中。暗室放入胶片,压片。取出胶片依次在显影液和定影液中泡洗。用水冲洗胶片,晾干。可在相应位置有清晰显影。在胶片上标出marker,目的蛋白及日期等信息。选择合适胶片进行扫描存档。
金融界2024年4月16日消息,据国家知识产权局公告,中科美菱低温科技股份有限公司申请一项名为“一种旋拧式离心机转子“,公开号CN117884265A,申请日期为2024年1月。
专利摘要显示,本发明公开了一种旋拧式离心机转子,包括转子和试管,还包括试管腔;所述试管腔包括腔体、驱动配合件、弧形板组和软质布,所述试管放置在所述腔体内;所述试管腔还包括驱动机构,所述驱动机构具有受压旋转,并带动所述驱动配合件同步旋转的运动行程,所述软质布具有随所述驱动配合件的旋转而收卷缠绕,并向内压迫所述弧形板组的运动行程,所述弧形板具有受压弹性形变,并向内压迫,直至抵触至所述试管的运动行程。本发明中,通过正/反方向旋转驱动机构,实现软质布的收卷缠绕,最终实现试管腔腔体直径的减小,以满足不同直径大小的试管在试管腔内的安装需求,从而解决现有技术中重复更换转子的问题。
本文源自金融界
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