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你是说DNA
的提取方法么?现在正在做这方面试验,希望能帮得上你
1)
研磨:取样少许置入1.5ml离心管中,以移液枪加入消化缓冲液600μl,冲入液氮或少许石英砂研磨至澄清。
2)
水浴:水浴温度55℃,水浴时间3-5h左右
3)
酚抽提:每支离心管中加入600μl
Tris饱和酚,轻柔的摇晃使固液混合充分。离心机4℃,8000r/min离心10min,以移液枪小心的将上清液取出至新管,重复步骤一次
4)
Cl抽提:向抽提出的上清液中加入等体积的Cl液,轻柔的摇晃使充分混匀,高速冷冻离心机4℃,10000r/min离心10min,以液枪小心的将上清液取出。
5)
DNA沉淀:向抽提的上清液中加入2倍体积的无水乙醇,并轻柔的摇晃使溶液充分,再置于-20℃冰箱中保存10min后高速冷冻离心机4℃,12000r/min离心5min,小心倾去乙醇,可见DNA沉淀物。
6)
DNA
洗涤:向在留有DNA沉淀物的离心管中加入-20℃冰箱中保存的70%乙醇500μl,后离心机4℃,12000r/min离心5min,小心倾去乙醇后可见离心管底白色小圆片状的DNA提取物。将离心管倒置于无菌室内室温至干燥。
7)
在做DNA提取的时候,用冰冷的95%的乙醇溶解RNA,得到丝状DNA。
DNA不溶于乙醇,实验中常常用乙醇来沉淀DNA。
实验步骤:
离心机是DNA提取生物样品分离的实验设备,在DNA提取中,高速冷冻离心机发挥着重要的作用,其中最关键的点是温度控制。以实验为例,在细胞的细胞核中,DNA与蛋白质结合形成染色体,因此提取DNA时既要将蛋白质等物质除尽,又要尽可能保持DNA分子的完整性,即保持DNA带不发生断裂,无外源核酸污染。
高温会造成DNA的变性失活,也就是DNA双链解链成为单链,但在温度下降后会恢复为双链形式。
DNA在溶液,尤其是水的稀溶液中,会发生自然的降解作用。降解作用速率和温度关系不大,但是反复的冻融会加速DNA的断裂和降解。
DNA提取除了在司法鉴定中扮演着举足轻重的角色以外,在基因工程和蛋白质工程等分子生物学领域也应用极广,而样品分离实验离不开离心机的性能技术指标与正确使用,比如转速设定、离心时间、摆放位置等,而其中最关键也是容易被忽视的是样品的温度控制。
其实不只是DNA提取,如生物制药或营养物质萃取等对生物活性保留要求很苛刻的技术项目,离心的温度都需要严格符合要求,与标准相差几摄氏度可能就会严重影响品质,若超过温度区间范围会对活性酶的指标有影响或者温度过低导致凝结,因此选用带精确温控的离心机则是重中之重。
需要严格温控的实验基本上都要求样品保持在较低的温度,因此在使用带冷冻功能的离心机之前需要进行预冷,并进行温度校准和监测温度波动。
综仪高速冷冻离心机,除了数据精度高、具备多级保护功能、还有温度精准控制的特点!
采用环保冷媒R404制冷剂,无环境污染;
采用进口高效制冷机组和进口电磁阀,温控精度高;
冷冻功能:最高转速时转子温度仍然可以保持在4℃;有预制冷功能;
微机控制,彩色大屏幕显示,程序可编可存,转速、离心力、时间、温度与加减速等参数,运行中可更改参数,无需停机;
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