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一、细菌能不能被彻底杀灭?为什么?

一、机械消毒法

此方法并非真正杀死微生物，而是通过机械排除。例如，刷洗、冲洗、擦拭、吸附、过滤等。工作人员进入洁净室前的洗手，也属于机械消毒法。由于反复冲洗、擦洗，微生物被机械地排除。有人证明，用8分钟流水冲洗可以除去80%的细菌，15分钟可以除去99.0%。

过滤除菌是利用物理阻留的方法去除微生物。例如，用砂滤法制备生活饮用水，工厂空气净化设施以及戴口罩等，都是利用过滤除菌的有效方法。目前，滤膜孔径最小可达0.01μm，能制取优质的注射用水，可将空气处理到100L中只有1颗0.3μm尘粒的超净水平。

二、热力消毒法

在所有消毒与灭菌方法中，热力是一种应用最早，效果最可靠，使用最广泛的方法。热力杀灭微生物的机理是损伤微生物的细胞壁，细胞膜，破坏微生物的蛋白质（凝固或变性），从而导致其死亡。热力消毒与灭菌的方法分为两类：干热和湿热。

A)干热消毒与灭菌

1.灼烧：灼烧是直接用火焰灭菌。如微生物实验室接种针、接种环、涂菌棒等不怕热的金属器材的灭菌。在没有其他办法灭菌的情况下，对于器材也可以用灼烧法灭菌。灼烧法灭菌温度很高，效果可靠，但对器材有破坏性。

2.干烤：干烤灭菌是在烤箱中进行。适用于高温下不损坏、不变质物品的灭菌。例如，玻璃制品：平板、试管、吸管，注射器等均可用此法灭菌，一般在180℃下，干烤1～2小时。

3.红外线照射：也是干热灭菌的一种方法。其波长是0.77～1000μm的电磁波，有良好的热效应，尤其是在1～10μm波长段。红外线的热能直接由放射的电磁波产生，不需要经空气传导，加热速度快。但热效应只能在照到的表面产生，不能使一个物体的左右前后均匀加热。高强度远红外线可以产生200℃高温，因此可以用于医疗器械的灭菌，20世纪60年代前曾受到重视，但由于后来塑料高分子产品增多，使这种灭菌方法未能广泛使用。

(B)湿热消毒与灭菌

1.煮沸法：煮沸法消毒是使用最早的消毒方法之一。由于其方法简单、方便、经济、实用效果好，因此今仍是一种常用的消毒方法。煮沸消毒的能力较强，一般在水沸腾后再煮5～15分钟，即可达到消毒目的。100℃几乎能立即杀灭细菌繁殖体、真菌、立克次氏体、螺旋体和病毒等。芽胞型菌则抗煮沸能力较强，一般要1小时以上，甚至高达8小时之多。如果能在煮沸时加入增效剂，可以增强煮沸消毒效果，如在煮沸针尖时，加入1～2%碳酸钠，煮沸5分钟即可达到灭菌要求，同时还要防止其生锈，保持它的锋利。零配件(如瓶塞穿孔器、接头、护套)的清洗处理中，加0.5%盐酸或氢氧化钠液煮沸也能起到增效的作用。

2.高压蒸汽灭菌：目前常用下排气式高压灭菌器，使用方法等介绍如下：

手提式高压灭菌器：是实验室、卫生医疗单位常用的小型灭菌器空拦。由铝合金材料制造，为单层圆筒，内有一铝质的盛物捅，直径28cm，深28cm，容积约181，全重18kg，使用压力<1.4kg/cm2。主要部件有：压力表1个，指示高压锅内压力。排气阀1个，下接排气软管，伸至盛物桶下部，用以排除冷空气。安全阀1个，当高压锅内压力超过1.4kg/cm2时，可以自动开启排气。使用方法：在高压锅内放入约4cm深的清水，将消毒物品放入盛物桶内，装物不宜太多，且应使物品间留有空隙，盖上锅盖，注意将排气软管插入盛物桶壁上的方管内，拧紧螺丝。当加热到表压为5～10磅/英寸2时，打开排气阀，放冷空气，至有蒸气排出，即关闭排气阀，待上升至所需压力，调节热源，维持到预定时间。结束后排气至0，打开盖子，取出物品。消毒液体时，最好慢慢冷却，以免减压过快液体外溢或瓶破裂。（1）必须将灭菌器内冷空气抽尽或排尽，空气的排尽程度与温度的关系极为密切（2）合理计算时间。其时间的计算，应从灭菌器内达到温度要求时算起，至完成灭菌为止。一般下排气式高压灭菌器为121℃15分钟或115℃30分钟。（3）包装与容器不宜过大，过紧，也不宜将物品放于铝饭盒内。（4）合理布放物品。不宜过多，一般为85%，且物品间留有空隙。（5）注意安全操作，每次灭菌前应检查灭菌器是否处于良好的工作状态，尤其是安全阀是否良好，盖是否关紧。加热宜均匀，灭菌后减压不可过猛。压力表退回“O”处才可打开盖。6）为监测灭菌效果，可采用留点温度计或嗜热脂肪芽胞菌生物指示菌片。

三、紫外线消毒杀菌原理与作用

紫外线可分为长波段、中波段和短波段3组。以短波段250．0～265．0nm的杀菌力最强。一般多以253．7nm作为紫外线杀菌波长的代表。紫外线照射能量较低，不足以引起原子的电离，仅产生激发作用，使电子处于高能状态而不脱开。当微生物被照射，此作用可引起细胞内成分，特别是核酸、原浆蛋白与酶的化学变化，从而使之死亡。

各种微生物对紫外线的耐受力不同，真菌孢子对紫外线的耐受力最强，芽胞菌次之，细菌繁殖体最差。但也有例外，如橙黄八叠球菌的耐受力反比枯草杆菌芽胞高。因紫外线是一种低能量的电磁辐射，故穿透力极差，空气中的湿度、尘粒对其均有影响；在液体中，亦随深度增加而降低。各种杂质(盐、有机物等)均可影响紫外线作用，它不能透过固体物质。普通玻璃中有氧化铁，可阻挡紫外线。因此，它无法透过2mm厚的窗玻璃。但能透过石英，糊窗纸可透过20～40％；聚氯乙烯薄膜，开始时可透过30%，但6h后，由于薄脱变质，透过率可以降至3％以下。

四、微波灭菌法

微波是指频率在30~3000MHz之间的电磁波。水可强烈地吸收微波，使其极性分子转动，分子间的磨擦而生热，且升温迅速，靠热力而灭菌。在数十秒至几分钟之内可达100～150℃，并全部杀死液体中的微生物，适于水溶性注射液的灭菌。另外，固体药材饮片及固体制剂（丸剂、散剂、胶囊粉等）也含少量水分，微波能穿透到固体内部，由表至里被均匀加热，而起干燥、灭菌的作用。多用于口服液体制剂的灭菌，有望用于注射液的灭菌。但可能对某些药品的PH值、含量、颜色有影响。

五、电消毒法

臭氧是以无声放电法产生的。在一对交流电极之间隔以介电体，当空气或氧气通过高压电极(6000～8000V)时，在具有足够动能的放电电子中，使氧分子电离，一部分氧分子被聚合为臭氧。臭氧有很强的杀菌力，高效、广谱。有的医用高分予器材厂采用臭氧发生器进行了净化车间的空气消毒，效果甚为满意。

六、辐射消毒法

(一)概况

二、蒸汽杀菌机用水量多少

100L。式蒸汽灭菌器(100L人工加水)，具有灭菌效果可靠，操作方便，节电耐用，外观优美等优点，其压力容器和储物桶均采用不锈钢制成。

高压蒸汽灭菌锅的灭菌流程

2022-04-26 16:07·心潮澎湃7高压蒸汽灭菌锅是利用饱和压力蒸汽对物品进行迅速而可靠地消毒灭菌的设备，适用于医疗卫生、科研、农业等单位。可对医疗器械、敷料、玻璃器皿、溶液培养基等进行消毒灭菌。

　　高压蒸汽灭菌锅按照样式和大小分为手提式高压蒸汽灭菌器、立式高压蒸汽灭菌器、卧式高压蒸汽灭菌器等。手提式高压蒸汽灭菌器的容积通常为18L、24L、30L。立式高压蒸汽灭菌器的容积范围通常为30L-200L，进一步又可分为手轮型、翻盖型、智能型。智能型又分为标准配置型、蒸汽内排型、真空干燥型。卧式高压蒸汽灭菌器通常为大型卧式高压灭菌锅。

　　高压蒸汽灭菌锅的灭菌操作程序

　　1.灭菌物品的包装和容器要合适

　　首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。需要灭菌的物品按需要分类包装，物品包装用线绳捆扎，以不松动散开为宜，不宜过紧，培养皿等器皿需要用牛皮纸包扎。

　　2.灭菌物品装放应合理

　　灭菌锅内物品不能过挤，不能超过锅内容量。尽量将同类物品装在同一锅内灭菌。若有不同类物品装放在一起，应以难达到灭菌物品的所需温度和时间为准。物品装放时，上下左右均应交叉错开，留出缝隙，使蒸汽容易穿透。大灭菌包应立着放上层，小包放下层，布类和金属类物品同时灭菌时，应将金属类物品包放在下层，使两者受热基本一致，并防止金属物品灭菌中产生的冷凝水弄湿包布。

　　加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。

　　3.排尽冷空气

　　打开电源加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。使用高压蒸汽灭菌器时，关键的是将锅内空气排尽。如锅内有空气，则气压针所指的压强不是饱和蒸汽产生的压强。相同的压强，混有空气的蒸汽其温度低于饱和蒸汽所产生的温度。因此完全排除锅内空气使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底。

　　常用方法是：关闭放气阀，通电后，待压力上升到0.05MPa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭放气阀。关阀再通电后，压力表上升达到0.1MPa时，开始计时，维持压力到的时间。

　　4.合理计算灭菌时间

　　待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。

　　灭菌时间包括：穿透时间，从锅内达到灭菌温度开始到锅内难达到的部位也达到此温度所需要的时间；维持时间，即杀灭微生物所需要的时间，一般以杀灭嗜热脂肪杆菌芽胞所需时间来表示；安全时间，为使灭菌得到确切保证所需要增加的时间，一般为热死亡时间的一半，其长短视灭菌物品而定。

　　对易导热的金属器材的灭菌，不需要安全时间。在灭菌时间内，要注意观察压力表，以保持规定的压力，维持到灭菌时间为止。在灭菌过程中，如有压力、温度下降，应重新升温升压，重新计时。

　　5.开盖操作

　　达到灭菌时间后即可切断电源，一般当压力表的压力降至0之后，再打开排气阀。有时，在压力降到0.05MPa，可缓慢放出蒸汽，注意不要使压力降低太快，以致引起激烈的减压沸腾，使容器中的液体四溢。当压力降到零后才能开盖，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。取出培养基摆在平台上以待冷凝，不可以长久不取出，否则容易引起培养基成分变化以至无法制作斜面培养基。

　　如果因为久不放气导致锅炉内产生负压、盖子打不开，可以将放气阀打开，让空气进入，内外压力平衡后盖子就可以打开了。取无菌物品时，要严格无菌操作。同时应分类放置，顺序发放取用。

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