微生物的培养与应用
1、培养基的种类：按物理性质分为固体培养基和液体培养基，按化学成分分为合成培养基和天然培养基，按用途分为选择培养基和鉴别培养基。
2、培养基的成分一般都含有水、碳源、氮源、无机盐P14
3、微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。
4、培养基还需满足微生物对PH、特殊营养物质以及O2的要求。
5、获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。
6、常用灭菌方法有：灼烧灭菌，将接种工具如接种环、接种针灭菌;干热灭菌：如玻璃器皿、金属用具等需保持干燥的物品。高压蒸汽灭菌：如培养基的灭菌。
7、用固体培养基对大肠杆菌纯化培养，可分为两步：制备培养基和纯化大肠杆菌。
8、固体培养基的制备：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板
9、微生物常用的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法。
10、平板划线法是通过连续划线，将菌种逐步稀释分散到培养基表面，稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，分别涂布到培养基表面。当它们稀释到一定程度后，微生物将分散成单个细胞，从而在培养基上形成单个菌落。
11、微生物的计数方法：活菌计数法、显微镜直接计数法、滤膜法。
12、活菌计数法就是当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少个活菌。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的只是一个菌落。
13、显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法，但它包括了死亡的微生物。
实验一
观察线粒体和叶绿体
1、实验原理
①叶绿体呈绿色的椭球形或球形，不需染色，制片后直接观察。②线粒体呈无色棒状、圆球状等，用健那绿染成蓝绿色后制片观察。
2、实验步骤
①观察叶绿体：制作藓类叶片的临时装片→先低倍镜后高倍镜观察叶绿体②观察线粒体：制作人的口腔上皮细胞临时装片(健那绿染液染色)→先低倍镜后高倍镜观察观察线粒体
3、注意问题
①实验过程中的临时装片要始终保持有水状态。
②要漱净口腔，防止杂质对观察物像的干扰。
③用菠菜叶带叶肉的下表皮的原因：靠近下表皮的叶为海绵组织，叶绿体大而排列疏松，便于观察;带叶肉是因为表皮细胞不含叶绿体。
④叶绿体在弱光下以椭球形的正面朝向光源，便于接受较多的光照;在强光下则以侧面朝向光源以避免被灼伤。
实验二
叶绿体色素的提取和分离
1、提取色素原理：色素能溶解在酒精或丙酮等有机溶剂中，所以可用无水酒精等提取色素。
2、分离色素原理：各色素随层析液在滤纸上扩散速度不同，从而分离色素。溶解度大，扩散速度快;溶解度小，扩散速度慢。
3、各物质作用：
无水乙醇或丙酮：提取色素;层析液：分离色素;二氧化硅：使研磨得充分;碳酸钙：防止研磨中色素被破坏。
4、结果：滤纸条从上到下依次是：胡萝卜素(最窄)、叶黄素、叶绿素a(最宽)、叶绿素b(第2宽)，色素带的宽窄与色素含量相关。
5、注意事项：
(1)画滤液细线：均匀，直，细，重复若干次(2)分离色素：不能让滤液细线触及层析液
实验三
探究酵母菌的呼吸方式
1、原理:酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸，产生二氧化碳和水：C6H12O6+6O2+6H2O6→CO2+12H2O+能量在无氧条件下进行无氧呼吸，产生酒精和少量二氧化碳：C6H12O6→2C2H5OH+2CO2+少量能量
2、检测：
(1)检测CO2的产生：使澄清石灰水变浑浊，或使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄。
(2)检测酒精的产生：橙色的重铬酸钾溶液，在酸性条件下与酒精发生反应，变成灰绿色。
1、生物的生殖：每种生物都能够产生自己的`后代，这就是~。
2、无性生殖：是指不经过生殖细胞的结合，由母体直接产生出新个体的生殖方式。易保持亲代的性状。
3、有性生殖：是指经过两性生殖细胞(也叫配子)的结合，产生合子，由合子发育成新个体的生殖方式。这是生物界中普遍存在的生殖方式，具有双亲的遗传性，有更强的生活力和变异性。
4、分裂生殖(单细胞生物特有)：是生物体由一个母体分裂成两个子体的生殖方式。如变形虫、细菌、草履虫。
5、出芽生殖：母体→芽体→新个体，如水螅、酵母菌。
6、孢子生殖：母体→孢子→新个体，如青霉、曲霉。
7、营养生殖：植物的营养器官(根、茎、叶)发育为新个体，如马铃薯块茎、草莓的匍匐茎，秋海棠等。
8、嫁接：一种用植物体上的芽或枝，接到另一种有根系的植物体上，使接在一起的两部分长成一个完整的新植物体的方法。
9、植物组织培养技术：外植体(离体组织或器官)→消毒→接种→愈伤组织(组织没有发生分化，只是一团薄壁细胞)→组织器官→完整植株。
10、配子生殖：由亲体产生的有性生殖细胞——配子，两两相配成对，互相结合，成为合子，再由合子发育成新个体的生殖方式，叫做～。
11、卵式生殖：卵细胞与精子结合的生殖方式叫做～。凡是种子植物用种子进行繁殖时，都属予卵式生殖。
12、受精作用：精子与卵细胞结合成为合子的过程，叫做～。
13、花粉管：是萌发的花粉粒内壁突出，从萌发孔伸出而形成的管状结构。主要作用是将其携带的精子和其他内容物运至卵器或卵细胞内，以利于受精作用。
生物监测作为显示压力蒸汽灭菌工艺杀灭微生物能力的最佳方法，甚至被业内人士称为灭菌效果监测的“金标准”。
不知道圈内的盆友们日常督促检查过程中有没有发现压力蒸汽灭菌监测方面的问题。比如：若为自制标准生物测试包制作的是否规范？每次使用完后能否对自制的布巾、包布进行清洗？生物指示物的放置是在灭菌工艺最严格挑战的地方？生物指示物使用后弃置前是否经过灭菌？我们一起再来梳理学习规范。
01
规范要求应至少每周进行一次生物监测，每周一次的要求是最低的强制要求。
02
紧急情况灭菌植入物时，使用含第5类化学指示物的生物PCD进行监测，化学指示物合格可提前放行，生物监测的结果应及时通报使用部门。在外来器械管理方面大家各自医院部门间协调是否流畅，尤其是外来器械能否在规定时间送达供应室，生物监测培养是多少小时完成？如何最大程度降低外来器械风险值得思考。
03
采用新的包装材料和方法进行灭菌时应进行生物监测。供应室护士长应同设备供应科建立良好的沟通协调关系，医院应赋予供应室在包装材料选择方面的话语权。
04
小型压力蒸汽灭菌器因一般无标准生物监测包，应选择灭菌器常用的、有代表性的灭菌物品制作生物测试包或生物PCD，置于灭菌器最难灭菌的部位，且灭菌器应处于满载状态。生物测试包或生物PCD应侧放，体积大时可平放。医院其他科室使用的小型压力蒸汽灭菌器供应室人员能否予以生物监测方法培训，尤其是放置位置和方法。
05
采用快速程序灭菌时，应直接将一支生物指示物，置于空载的灭菌器内，经一个灭菌周期后取出，规定条件下培养，观察结果。专职人员一定要清楚医院有几台小型灭菌器，几台快速灭菌器，做到心中有数。
06
灭菌器新安装、移位和大修后的监测
应进行物理监测、化学监测和生物监测。物理监测、化学监测通过后，生物监测应空载连续监测三次，合格后灭菌器方可使用，监测方法应符合GB/T20367的有关要求。对于小型压力蒸汽灭菌器，生物监测应满载连续监测三次，合格后灭菌器方可使用。预真空（包括脉动真空）压力蒸汽灭菌器应进行B-D测试并重复三次，连续监测合格后，灭菌器方可使用。
来源：感控plus
