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高压蒸汽灭菌具有灭菌速度快、成效可靠、温度高、穿透力强等优点，使用不当，可导致灭菌的失败。
在灭菌中应注意的几点：
一、消毒物品的初步处理。凡接触过病原微生物的医疗器械、被单、衣物等均应先用化学消毒剂进行消毒，然后按照常规清洗。特别是传染病房用后的各类物品，要严格把关，先严密消毒后，再清洗、消毒。常规清洗时，先用洗涤剂溶液浸泡擦洗，去除物品上的油污，血垢等污物，然后用流水冲净。有轴节、齿槽和缝隙等器械和其它物品，应尽可能张开或拆卸，进行有效洗刷。洗涤后的物品应擦干，按各临床需要分类包装，以免再污染。清除污染前、后物品的盛器和运送工具应严格区分，并有明显标志，以防交叉感染。
二、消毒物品的包装和容器要合适。包装采用双层包布白色棉布，新包布应先洗涤去浆后再使用。物品包装用线绳捆扎，以不松动散开为宜，不宜过紧。使用容器盛装时，选用既可阻挡外界微生物侵入，又有较好的蒸汽穿透性。如特制的注射器灭菌盒、装敷料的贮槽等。民用铝盒因蒸汽难以进入，而盒内的空气又不易排出，按常规灭菌常不能达到灭菌成效。试验对比表明它的污染率大大高于医用铝盒。所以不能使用民用铝盒装注射器或器械灭菌。
三、消毒物品装放应合理。消毒物品过多或放置不当都可影响灭菌成效。消毒锅内物品不能过挤，不超过锅内容量。尽量将同类物品装一锅内灭菌。若有不同类物品装放一起，应以量难达到灭菌物品所需的温度和时间为准。物品装放时，上下左右均应交叉错开，留出缝隙，使蒸汽容易穿透。大消毒包应立着放上层，小包放下层大搪瓷盒和贮槽也应立着放布类和金属类物品同时灭菌，应将金属类物品包放在下层，使两者受热基本一致，并防金属物品灭菌中产生的冷凝水弄湿包布。
四、排尽空气。使用高压蒸汽消毒锅时，很关键的是将锅内空气排尽。如锅内有空气，则气压针所指的压强不是饱和蒸汽产生的压强。相同的压强，混有空气的蒸汽其温度低于饱和蒸汽所产生的温度。
五、合理计算灭菌时间。灭菌时间包括：①穿透时间，从锅内达到灭菌温度开始计算时间，到锅内较难达到的部位也达到此温度的时间；②维持时间，即杀灭微生物所需时间，一般以杀灭嗜热脂肪杆菌芽胞所需时间来表示；③安全时间，为使灭菌得到确切确保所需增加的时间。一般为热死亡时间的一半，其长短视消毒物品而定。对易导热的金属器材的灭菌，不需要安全时间。在灭菌时间内，要注意压力表，及时间调节进气量，以保持在的压力，维持到灭菌时间为止。在灭菌过程中，如有压力、温度下降，应重新升温升压，重新计时。
六、灭菌后。要求消毒物品干燥后，检查指示剂达到灭菌要求即可出锅。取无菌物品时，要严格无菌操作，开盖物品先将盖盖好，贮槽关闭好通气孔。同时应分类放置，顺序发放取用。超过有效期，炎热潮湿季节一般不超过七天。
七、防止超热蒸汽。超热蒸汽温度虽高，但象空气一样，遇到消毒物品时不能凝成水，不能释放潜热，所以对灭菌不利。防止超热的办法是使用外源蒸汽灭器时，不要使夹层的温度高于消毒室的温度，两者应相近不要使压力过高的蒸汽进入消毒室内；灭菌时不要用压力高的蒸汽加热到要求温度，然后再降压力。
八、注意安全。每次灭菌前应检查灭菌器是否处于良好的工作状态，尤其是安全阀是否良好。消毒后减压不可过猛过快。应等压力表归回“0“位时，才可以打开锅门。如果消毒锅内是瓶装溶液，且突然开锅，则玻璃骤然遇到冷空气易发生爆裂，必须注意如果突然把锅门开得太大，冷空气大量进入，易使包布周围蒸汽凝成水点而堵塞包布孔眼，阻碍包布内蒸汽排出，而使物品潮湿。
九、不能使用高压蒸汽灭菌器消毒任何有破坏性材料和含碱金属成份的物质。消毒这些物品将会导致爆炸或腐蚀内胆和内部管道，以及破坏垫圈。
危险物品清单：1.爆炸物质乙二醇二硝酸酯（硝化甘醇），硝酸甘油，硝化纤维素（硝化纤维素滤器）和所有含硝酸根的酯类。三硝基苯，黄色炸药，苦味酸和所有易燃易爆的硝基，过氧乙酸，甲烷基，乙基，甲醇，过氧化氢，过氧化物，苯甲酰，苯甲酰基及有机过氧化物。2.可燃性物质金属锂、钾、钠、黄磷、磷、硫化物、红磷。明胶、碳化钙（电石）、氧化钙（石灰），镁粉，连二亚硫酸钠（保险粉）。3.氧化剂氯化钾，氯化钠，氯化铵和其他氯化物。（粉剂）高氯酸钾，高氯酸钠，高氯酸铵和其他高氯化物。硝酸钾，硝酸钠，硝酸铵和其他硝酸物。过氧化钾，过氧化钠，过氧化钡和其他无机过氧化物。亚氯酸钠和其他亚氯化物，次氯酸钙和其他次氯酸物。4.易燃物质二，醚，汽油，乙醛（醋醛），氧化丙稀，环氧丙烷，二硫化碳和其他燃点在-30℃～0℃间的物质。甲醇，乙醇，二甲苯，苄基，乙酸苄酯，和其他燃点在0℃～30℃之间的物质（醇类）。灯油，火油，汽油，异戊醇，乙酸（醋酸），和其他燃点在30℃～65℃之间的类似物质。5.易燃的气体（氢气，乙炔，次乙基，甲烷）乙烷，丙烷，丁烷和其他在15℃及一个大气压下的气体。6．含有盐分的液体漏出或溢出时，一定要及时擦干净，沿着盖子的密封圈要有效擦干，否则会腐蚀容器和管道。7．在打开盖子前，确认压力已归于“0/npa”以下。8．不要在爆炸性气体附近使用仪器。高压蒸汽灭菌器的分类 cdtouching/更新于2012-06-12点击量：245。
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自动高压灭菌器常用的消毒灭菌方法多采用物理方法和化学方法两大类。
1.干热灭菌法是利用恒温干燥箱内120℃-150℃的高热，并保持90-120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的的一种方法。
主要适用于不便在压力蒸汽灭菌器中进行灭菌，且不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器械以及不能和蒸汽接触的物品的灭菌。用此方法灭菌的物品干燥，易于贮存。酒精灯火焰烧灼灭菌法也是属于干热灭菌的方法之一，在进行动物细胞体外培养工作时，常须利用工作台面上的酒精灯火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行补充灭菌。
2.湿热灭菌法压力蒸汽湿热灭菌法是目前最常用的一种灭菌方法。
它利用高压蒸汽以及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而使微生物死亡。适合于布类工作衣、各种器皿、金属器械、胶塞、蒸馏水、棉塞、纸和某些培养液的灭菌。
3.射线灭菌法利用紫外线灯进行照射灭菌的方法。
紫外线是一种低能量的电磁辐射，可以杀灭多种微生物。紫外线的作用机制是通过对微生物的核酸及蛋白质等的破坏作用而使其灭活。适合于实验室空气、地面、操作台面灭菌。
4.过滤除菌法是将液体或气体通过有微孔的滤膜过滤，使大于滤膜孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌的方法。过滤除菌法大多用于遇热易发生分解、变性而失效的试剂、酶液、血清、培养液等。目前，常用微孔滤膜金属滤器或塑料滤器正压过滤除菌，或用玻璃细菌滤器、滤球负压过滤除菌。
5.化学消毒剂消毒法用于那些不能利用物理方法进行灭菌的物品、空气、工作面、操作者皮肤、某些实验器皿等。在使用时应注意安全，特别是用在皮肤或实验材料上的消毒剂，须选用合适的药剂种类、浓度和处理时间，才能达到安全和灭菌的目的。
实验医学微生物学常用的器材包括玻璃器材、金属器械、橡胶制品及塑料制品等，每类器材的处理及消毒措施都有不同。严格的消毒灭菌工作极为重要，直接影响着整个实验能否顺利进行。
消毒灭菌方法主要有物理方法和化学方法两大类。物理方法包括干热灭菌法、湿热灭菌法、射线杀菌法、过滤除菌法，化学方法则包括消毒剂、抗生素等。
干热灭菌法是利用恒温干燥箱内120oC～150oC的高热，并保持90～120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的的一种方法。适用于不易在压力蒸汽灭菌器中进行灭菌，且不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器械以及不能和蒸汽接触的物品的灭菌。酒精灯火焰烧灼灭菌法也是属于干热灭菌的一种方法，常用于动物细胞体外培养工作时补充灭菌。
湿热灭菌法，压力蒸汽湿热灭菌法是目前最常用的一种灭菌方法，利用高压蒸汽以及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而使微生物死亡。适合于布类工作衣、各种器皿、金属器械、胶塞、蒸馏水、棉塞、纸和某些培养液的灭菌。
射线灭菌法，利用紫外线灯进行照射灭菌的方法。紫外线可以杀灭多种微生物。适合于实验室空气、地面、操作台面灭菌。灭菌时间为30min。在使用紫外线杀菌时应注意，不能边照射边进行实验操作，因为紫外线对人体皮肤有伤害，对培养物及一些试剂等也会产生不良影响。
过滤除菌法是将液体或气体通过有微孔的滤膜过滤，使大于滤膜孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌的方法。过滤除菌法大多用于遇热易发生分解、变性而失效的试剂、酶液、血清、培养液等。常用微孔滤膜金属滤器或塑料滤器正压过滤除菌，或用玻璃细菌滤器、滤球负压过滤除菌。
化学消毒剂消毒法用于那些不能利用物理方法进行灭菌的物品、空气、工作面、操作者皮肤、某些实验器皿等。常用的化学消毒剂包括甲醛、高锰酸钾、70%～75%乙醇、过氧乙酸、来苏尔水、0.1%新洁尔灭、环氧乙烷、碘伏或碘酊等。
抗生素抑菌法主要用于培养液，是培养过程中预防微生物污染的重要手段以及作为微生物污染不严重时的“急救”措施。常用的抗生素有青霉素、链霉素和新霉素等。
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