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融合处理后的细胞是否可以直接用于培养?为什么,离心机的温度控制对DNA的影响

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一、融合处理后的细胞是否可以直接用于培养?为什么

融合处理后的细胞不可以直接用于培养。原因是:融合处理后的细胞群中可能还存在着未发生融合的细胞,所以要经过筛选后才能进行培养。

细胞融合的方法:

1、仙台病毒法融合

①两种细胞在一起培养,加入病毒,在4℃条件下病毒附着在细胞膜上。并使两细胞相互凝聚;

②在37℃中,病毒与细胞膜发生反应,细胞膜受到破环,此时需要Ca2+和Mg2+,最适PH为8.0一8.2;

②细胞膜连接部穿通,周边连接部修复,此时需Ca2+和ATP;

④融合成巨大细胞,仍需ATP。

2、聚乙二醇(PEG)法

聚乙二醇(PEG)结构为:HOH2C(CH20CH2)nCH2OH,分子量大于200小于6000者均可用作细胞融合剂。PEG经高压灭菌后,与温热的Engle氏液混合。一般选用分子量为4,000,常用浓度为50%,pH8.0~pH8.2(用10%NaHCO3调整),分子量小的PEG,融合效应差,又有毒性,分子量过大,则粘性太大,不易操作。

3、电融合法

在直流电脉冲的诱导下,细胞膜表面的氧化还原电位发生改变,使异种细胞粘合并发生质膜瞬间破裂,进而质膜开始连接,直到闭和成完整的膜,形成融合体。

优点:融合率高、重复性强、对细胞伤害小;装置精巧、方法简单、可在显微镜下观察或录像观察融合过程;免去PEG诱导后的洗涤过程、诱导过程可控性强。

4、离心、振动

二、细胞融合的融合方法

同种细胞在培养时,当两个细胞相互靠近并自发合并,这被称为自发融合。而异种细胞之间的融合,则需要通过诱导剂处理才能实现,这种情况下称之为诱发融合。

仙台病毒法是常用的细胞融合技术之一。首先,在两个细胞的培养过程中加入病毒,然后在4℃条件下,病毒会附着在细胞膜上,促使两个细胞相互凝聚;接着,将细胞置于37℃环境中,病毒与细胞膜发生反应,导致细胞膜破裂,此时需要Ca2+和Mg2+离子,最适pH值为8.0到8.2。随后,细胞膜连接部分穿通,周边连接部分修复,这同样需要Ca2+和ATP的参与;最终,两个细胞融合成一个巨大的细胞,而这一过程仍然需要ATP的持续作用。

聚乙二醇(PEG)法也是一种常用的细胞融合技术。聚乙二醇(PEG)的化学结构为HOH2C(CH20CH2)nCH2OH,通常分子量在200至6000之间可作为细胞融合剂。在使用前,PEG需要经过高压灭菌处理,然后与温热的Engle氏液混合。一般推荐使用分子量为4,000的PEG,常用浓度为50%,pH值范围为8.0至8.2(通过10%NaHCO3调整)。分子量较小的PEG融合效果较差且具有毒性,而分子量过大的PEG则过于粘稠,不易操作。

电融合法利用直流电脉冲来改变细胞膜表面的氧化还原电位,从而促使异种细胞粘附并发生质膜瞬间破裂,随后质膜开始连接,直到闭合形成完整的膜结构,形成融合体。此方法的优点在于融合率高、重复性强、对细胞损伤小;设备精巧、操作简便,可以在显微镜下观察或录像记录融合过程;此外,无需PEG诱导后的洗涤步骤,且诱导过程易于控制。

离心机的温度控制对DNA的影响

2022-11-30 10:45·综仪实验室离心机耗材

离心机是DNA提取生物样品分离的实验设备,在DNA提取中,高速冷冻离心机发挥着重要的作用,其中最关键的点是温度控制。以实验为例,在细胞的细胞核中,DNA与蛋白质结合形成染色体,因此提取DNA时既要将蛋白质等物质除尽,又要尽可能保持DNA分子的完整性,即保持DNA带不发生断裂,无外源核酸污染。

01温度对DNA的影响

高温会造成DNA的变性失活,也就是DNA双链解链成为单链,但在温度下降后会恢复为双链形式。

DNA在溶液,尤其是水的稀溶液中,会发生自然的降解作用。降解作用速率和温度关系不大,但是反复的冻融会加速DNA的断裂和降解。

DNA提取除了在司法鉴定中扮演着举足轻重的角色以外,在基因工程和蛋白质工程等分子生物学领域也应用极广,而样品分离实验离不开离心机的性能技术指标与正确使用,比如转速设定、离心时间、摆放位置等,而其中最关键也是容易被忽视的是样品的温度控制。

其实不只是DNA提取,如生物制药或营养物质萃取等对生物活性保留要求很苛刻的技术项目,离心的温度都需要严格符合要求,与标准相差几摄氏度可能就会严重影响品质,若超过温度区间范围会对活性酶的指标有影响或者温度过低导致凝结,因此选用带精确温控的离心机则是重中之重。

需要严格温控的实验基本上都要求样品保持在较低的温度,因此在使用带冷冻功能的离心机之前需要进行预冷,并进行温度校准和监测温度波动。


02高速冷冻离心机特点

综仪高速冷冻离心机,除了数据精度高、具备多级保护功能、还有温度精准控制的特点!

MH3180R高速冷冻离心机

SH2160R高速冷冻离心机


采用环保冷媒R404制冷剂,无环境污染;

采用进口高效制冷机组和进口电磁阀,温控精度高;

冷冻功能:最高转速时转子温度仍然可以保持在4℃;有预制冷功能;

微机控制,彩色大屏幕显示,程序可编可存,转速、离心力、时间、温度与加减速等参数,运行中可更改参数,无需停机;

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在细胞融合实验中离心机的作用有哪些
发布人:pqlzyo456 发布时间:2025-01-07