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腺病毒微生物学检查,认识病毒:病毒的形态结构

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一、腺病毒微生物学检查

形态学检查对于难以培养的肠道腺病毒,从粪便样本中粗提后,经电子显微镜或免疫电镜观察,以识别病毒形态。分离与鉴定工作包括:

1.分离培养:尽快从感染部位获取样本,包括患者咽喉、眼分泌物、粪便和尿液等,并加入抗生素处理过夜,离心后取上清接种在敏感细胞(如293、Hep-2或HeLa细胞等),在37℃下培养,观察到典型的细胞病变效应(CPE),如细胞变圆、聚集成团、有拉丝现象,其中最显著的表现是病变细胞聚集成葡萄串状。

2.病毒鉴定:使用荧光标记的抗六邻体抗体与分离培养的细胞作用,鉴定腺病毒。同时,通过血凝抑制(hemoagglutinationinhibition,HI)试验或中和试验(neutralizationtest,NT)检测特定抗原并鉴定病毒血清型。

腺病毒鉴定可通过Shellvial技术进行快速检测。将病毒样本通过抗生素和离心处理,取上清接种于含有细胞的Shellvial培养瓶中,培养1~2天后,使用特异性六邻体单克隆抗体检测其抗原表位。此外,直接用病人鼻粘膜上皮脱落细胞进行病毒抗原检测。

通过DNA杂交或内切酶酶切等方法鉴定分离培养的病毒DNA;PCR技术用于诊断腺病毒感染,设计引物主要基于腺病毒六邻体、VAI和VAII编码区序列,能检测所有血清型,并具有高敏感性,能检测某些患者潜在的腺病毒。使用腺病毒41型BgIII-D片段作为探针诊断腺病毒腹泻,检出率可达80%。

血清学检查通常采用IF、CF、EIA、HI及NT等试验方法,通过比较患者急性期和恢复期双份血清的抗体效价,若恢复期血清抗体效价比急性期增长4倍或以上,具有诊断意义。快速检测血清可用ELISA法或乳胶凝集试验。


扩展资料

腺病毒(adenovirus)是一种没有包膜的直径为70~90nm的颗粒,由252个壳粒呈廿面体排列构成。每个壳粒的直径为7~9nm。衣壳里是线状双链DNA分子,约含35000bp,两端各有长约100bp的反向重复序列。由于每条DNA链的5'端同相对分子质量为55X103Da的蛋白质分子共价结合,可以出现双链DNA的环状结构。

二、在光学显微镜下能看见病毒吗?

目前人类认识的最小生命形态,而电子显微镜是对它们进行直接观察的重要工具,许许多多各种各样病毒的发现都依赖于电子显微镜的广泛应用。

利用电镜技术可以对病毒形态结构、发展发育以及对靶细胞的作用进行研究,为病毒性疾病的病因分析及防治提供了形态学的依据。对于不会明显引起细胞发生明显病变的病毒,如风疹病毒、鼻病毒等,电镜技术也是一种可靠的鉴定、诊断手段。

尤其在动物疫苗研制及其产品制备过程中,几乎离不开电镜技术的检测。使用电镜检测能使疫苗研制少走弯路,加速进程,提高质量,特别是在驯化、培育或筛选目的毒中混入非目的毒或新出现的病毒时,更能凸显电镜的功能,可迅速、直观地做出诊断。

下图为中科科仪场发射扫描电子显微镜KYKY-EM8100观测磁珠偶联兔出血症病毒的实例:

图1两千倍

图2五千倍

图3一万倍

图4二万倍

认识病毒:病毒的形态结构

2020-02-15 09:14·赛医学

“百闻不如一见”一语道破视觉在人类认识客观世界的关键作用。病毒形态学是研究病毒形态结构特征及其形态发生的一门学科。病毒的种类繁多,形态结构各异,大小也不相同。但病毒的形态具有独特性,可根据其形态特征进行病毒的检测和鉴定。因此,病毒形态学在病毒鉴定和病毒致病机制等研究方面发挥着重要作用。由于病毒很小(通常为20~200nm),无法通过光学显微镜直接观察,研究病毒形态学必须借助电子显微镜技术。

病毒的化学组成和结构

病毒的形态结构受到其化学组成的影响。病毒颗粒的基本化学组成是核酸和蛋白质,有的病毒还具有脂质包膜,这些化学成分形成病毒的各种结构。

所有成熟的病毒至少是由一种或几种蛋白质和一种核酸(DNA或RNA)组成。一个完整的病毒颗粒通常由衣壳、核酸、包膜及刺突等结构组成(图1)。

图1病毒的结构示意图

1.衣壳

病毒衣壳主要由蛋白质组成,衣壳内包裹着由病毒核酸和与其相结合的蛋白质等构成的病毒核心。病毒衣壳的形态是病毒分类或病毒鉴定的重要依据。衣壳由壳粒以非共价键方式结合形成,壳粒形成电镜下可见的形态亚单位(图2)。病毒的衣壳具有多种功能,包括能够保护病毒核酸,使其免受核酸酶或其他理化因素的破坏;参与病毒感染细胞的过程,决定病毒对宿主细胞的嗜性;具有抗原性,诱导宿主产生特异性免疫反应等。

图2腺病毒,其壳粒清晰可辨

2.核酸

病毒核酸是病毒基因组的重要组成部分,每个病毒只含有一种核酸,DNA或者RNA,决定病毒的遗传和变异特征。病毒的衣壳与其内部的病毒基因组等结构合称为核衣壳。病毒核酸的形式多样化,如双链DNA、单链DNA、双链RNA、单链RNA(又分为正链RNA和负链RNA)、分节段RNA、线状DNA和RNA、环状DNA等。病毒核酸的类型及形式也是病毒分类的重要依据。

3.包膜及刺突

除了蛋白衣壳与核酸等结构外,有些病毒还具有包膜和刺突结构。病毒包膜由脂质组成,为脂质双层膜,来源于宿主细胞。包膜具有维系病毒结构、保护病毒衣壳的作用。包膜上的突起结构称为刺突(图3),刺突由蛋白质组成。刺突具有多种生物活性,是启动病毒感染(吸附、穿入)所必需的。脂溶剂可去除包膜使病毒丧失活性。

图3流感病毒包膜上的刺突(箭头示)

病毒的形态结构类型

病毒结构的形式很多。很多病毒呈立体对称结构,大致可以分为三种:二十面体立体对称结构、螺旋对称结构和复合对称结构。

1.二十面体立体对称

二十面体立体对称的病毒衣壳是由20个等边三角形组成的立体结构,包括12个顶角、20个三角面和30条边。病毒的顶角、三角面及边均由壳粒构成。腺病毒(图4)的结构是典型的二十面体立体对称。除痘病毒外,几乎所有脊椎动物DNA病毒核衣壳均为二十面体立体对称结构。部分RNA病毒核衣壳也呈二十面体立体对称结构。

图4腺病毒形态(负染)。直径约80nm,箭头示2对称的病毒颗粒,三角示破碎的病毒颗粒

2.螺旋对称

螺旋对称的病毒衣壳沿着轴心进行螺旋排列,形成高度有序的结构。蛋白亚单体盘绕成对称的螺旋状或弹簧状衣壳,衣壳呈中空的圆筒状(图5),核酸位于其中。许多动物病毒为螺旋对称型,且包裹一层脂质膜。动物病毒中螺旋对称的病毒均属有包膜的单股RNA病毒,如弹状病毒、正黏病毒和副黏病毒等。

图5仙台病毒的螺旋对称核衣壳(箭头示)

3.复合对称

呈复合对称的病毒结构复杂,既有螺旋对称又有立体对称,仅少数病毒为复合对称结构。具有复合对称结构的典型例子是有尾噬菌体,病毒由头部、尾部、附属的尾盘和尾丝等结构组成,包装有病毒核酸的头部通常呈立体对称,尾部呈螺旋对称。动物病毒呈复合对称的目前仅见于痘病毒(图6),其病毒核心呈对称的哑铃状,在病毒核心两侧有对称的侧体结构。

图6痘苗病毒形态(负染)。大小约225nm×300nm,表面为条索状结构。箭头示侧立的病毒颗粒

本文内容摘自中国疾控中心病毒病所洪涛院士及中国医学科学院病原生物学研究所王健伟研究员主编的《医学病毒图谱》一书。

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检测病毒形态学是不是看电镜检查的目的
发布人:piaozhe79 发布时间:2025-03-29