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凯氏定氮法是一种广泛使用的氮元素定量分析方法，其操作流程主要包括样品处理、消解和蒸馏三个步骤。
在样品处理阶段，首先需要精确称取一定量的固体、半固体或液体样品，将样品移入干燥的定氮瓶中，加入硫酸铜、硫酸钾和硫酸，然后斜支于石棉网上小火加热，直至样品炭化。待泡沫停止后，继续加热至液体呈蓝绿色澄清透明，再加热0.5小时，最后冷却并加入水，移入容量瓶中混匀备用。
接着进行试剂空白试验，与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸按相同方法操作。
消解阶段是凯氏定氮法的关键步骤，一般温度设在240度及以上，快速消解可适当提高温度甚至用最大温度。将定氮装置装好，于水蒸气发生器内加入甲基红指示剂、硫酸和玻璃珠，控制加热煮沸。
在蒸馏阶段，首先在接收瓶中加入硼酸溶液和混合指示剂，将消化液由小玻璃杯流入反应室，加入氢氧化钠溶液，控制蒸气通入反应室，使氨通过冷凝管进入接收瓶。蒸馏5分钟后移动接收瓶，再蒸馏1分钟，用少量水冲洗冷凝管下端，最后取下接收瓶，用硫酸或盐酸标准溶液定至终点。
整个凯氏定氮法操作流程在实验室中已经逐步被消煮仪处理方法取代，该方法更安全、可操作性强，一次可处理多个样品。消解温度通常设在240度及以上，快速消解可通过适当提高温度实现。这一现代化方法已成为凯氏定氮法的首选处理方法。
凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准碱滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。
关于凯氏定氮法测定蛋白质含量，凯氏定氮这个很多人还不知道，今天来为大家解答以上的问题，现在让我们一起来看看吧！
1、一、实验原理 蛋白质是含氮的有机化合物。
2、蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。
3、然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，蛋白质含量。
4、含氮量*6.25=蛋白含量 1.有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4作用下，硝化生成（NH4）2SO4凯氏定氮法凯氏定氮法反应式为： 2NH2+H2SO4+2H=(NH4)2SO4（其中CuSO4做催化剂） 2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3，收集于H3BO3溶液中反应式为: (NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4 2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O 3.用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量 反应式为： (NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3 (NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3 二、操作 样品处理：精密称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品（约相当氮30-40mg），移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，6g硫酸钾及20毫升硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上，小火加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5小时。
5、取下放冷，小心加20ml水，放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。
6、取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸同一方法做试剂空白试验。
7、但是此法比较危险，不易在实验室演示，现在大多数实验室有消煮仪一次可以进行多个（一次可以消煮16个样品）样品处理，并有通风橱进行通风，温度可以自己设定，更加安全和可操作性，因此逐步成为主要的凯氏定氮法的首选处理方法。
8、 一般消解温度都设在240度及240度以上，如果想快速消解可以适当提高温度甚至可以用最大温度进行消解。
9、 2、按图装好定氮装置，于水蒸气发生器内装水约2/3处加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。
10、 3、向接收瓶内加入10ml2%硼酸溶液及混合指示剂1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。
11、将10ml40%氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其缓慢流入反应室，不能立即将玻璃盖塞紧，这样易使玻璃塞粘在进样口，应先用蒸馏水冲洗然后再盖，并加水于小玻璃杯以防漏气。
12、夹紧螺旋夹，开始蒸馏，蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏5min。
13、移动接收瓶，使冷凝管下端离开液皿，再蒸馏1min，然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。
14、取下接收瓶，以0.05N硫酸或0.05N盐酸标准溶液定至灰色或蓝紫色为终点。
15、 同时吸取10.0ml试剂空白消化液按3操作。
16、 三、计算 X=(（V1-V2）*N*0.014)/(m*（10/100）)*F*100% X：样品中蛋白质的百分含量，g； V1：样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml； V2：试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积，ml； N：硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度； 0.014：1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数； m：样品的质量（体积），g（ml）； F：氮换算为蛋白质的系数。
17、蛋白质中的氮含量一般为15～17.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵为5.30。
金融界2025年1月10日消息，国家知识产权局信息显示，海能未来技术集团股份有限公司取得一项名为“一种凯氏定氮高效蒸馏系统、凯氏定氮仪及蒸馏方法”的专利，授权公告号CN118681247B，申请日期为2024年6月。
天眼查资料显示，海能未来技术集团股份有限公司，成立于2006年，位于济南市，是一家以从事仪器仪表制造业为主的企业。企业注册资本8457.98万人民币，实缴资本2625.56万人民币。通过天眼查大数据分析，海能未来技术集团股份有限公司共对外投资了20家企业，参与招投标项目348次，知识产权方面有商标信息7条，专利信息121条，此外企业还拥有行政许可24个。
本文源自金融界
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