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在准备阶段,需确保所有所需工具齐全,并检查无菌袋的完整性,为接下来的操作做好充分准备。
使用记号笔在无菌袋上清晰标注单位名称及采样时间,便于后续追溯与识别。
在取下水龙头过滤网前,需确认水龙头为金属材质,并移除所有配件,以确保灼烧步骤的顺利进行。
打开水阀,放水约2分钟,以清除管道中的残留水分,为取样创造干净的环境。
用镊子夹持酒精棉,先对水龙头内壁进行擦拭,再对外壁进行擦拭,每个步骤均重复两次,确保彻底清洁。
点燃酒精棉,对水龙头进行2分钟的灼烧消毒,以杀灭可能存在的微生物。
重新打开水阀,进行水流冲洗,以清除可能的杂质与残留。
撕开无菌袋,接入适量的水。随后,挤出部分空气,将圈口封闭并打结,确保样品的密封性。
以下是微生物限度的检测步骤:
1、装待检品水样的容器、取样的吸管、镊子等用品均要灭好菌,取水点打开让水流动一段时间。后快速取水样到容器中。
2、把东西带入微生物限度实验室,以下步骤尽量在无菌条件下操作。
3、先用缓冲液(PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液)对待检水样进行1:
1、0的稀释(10ml纯化水加90ml的缓冲液),后取10ml进行过滤,冲洗(用缓冲液50ml),冲洗量可按照验证方法的量,但不宜太多,主要是考虑避免滤膜上的微生物受损伤。
4、视情况可做2~3个梯度的稀释浓度进行过滤,并每种培养基做双份测试,当时在深圳药检所学习时,做了三个梯度,每个梯度每种培养基做了两份,一个试样水就用掉了12张膜。
5、纯化水微生物限度(微限)实验做三个梯度的理由,曾经有一个例子(药品):曾经遇到过的一种情况,用1:
1、0供试液倒平皿,可能会一个菌都不长,而1:
1、00及1:
1、000却长很多,这主要是因为样品药物有抑菌的作用,在1:
1、0的条件下抑菌性还很高而是细菌被抑制生长,而1:
1、00、1:
1、000时被稀释,抑菌性减小,有利于细菌的生长,这也是实验要首先做验证的原因,虽然纯化水出现这种可能性是微乎其微,这么做应该算是一种严谨的态度吧。
6、过滤后,将集菌面朝上,贴于培养基上,靠培养基对膜的渗透供养菌生长,使其在膜上凸起生长,利于计数。反之则细菌向培养基渗入生长,会变模糊。
7、营养琼脂培养基置于30-35摄氏度培养3天,玫瑰红钠在23-28摄氏度培养3-5天,每天记录细菌生长情况。
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